Validación de la determinación de cobre en suero empleando el ácido bicinconínico: Relación cobre/ceruloplasmina en pacientes con enfermedad de Wilson y pacientes sin la enfermedad / Validation of the determination of copper in serum using bicinchaninic acid: Relation copper/ceruloplasmin in patients with Wilson disease and patients without the disease

Se optimizó y validó un método colorimétrico para la determinación de cobre sérico empleando el ácido bicinconínico, el cual forma rápidamente un complejo violeta con el cobre I. El método presenta linealidad hasta 300 ug/dL y el límite de detección es de 8 ug/dL. La recuperación promedio obtenida fue de 99,7 por ciento. La bilirrubina y otros iones como hierro, calcio, magnesio y zinc no producen interferencia. La imprecisión para sueros con valores bajos, medios y altos mostraron coeficientes de variación de 2,6 1,8 y 1,2 por ciento en un mismo día y 4,8 3,0 y 1.5 por ciento día a día respectivamente. El método correlaciona adecuadamente con el análisis de cobre empleando dibencilditiocarbamato de zinc. Además se comparó la relación cobre total en suero/actividad de ceruloplasmina en pacientes con enfermedad de Wilson y personas normales. Se observó que en pacientes con enfermedad de Wilson esta relación es superior a 2,0 mientras que en heterocigotos y personas que no padecen esta enfermedad la relación es cercana a 1,0. Esta relación podría emplearse como un índice de la concentración de cobre no unido a ceruloplasmina. Palabras clave: cobre en suero, ceruloplasmina, enfermedad de Wilson, ácido bicinconínico.

Valores de referencia de colinesterasa plasmática y eritrocítica en población costarricense: comparación del desempeño clínico de ambas enzimas / Reference valors of plasmatic cholinesterase and erythrocyte in costarrican population: comparation of clinic performarce of its enzimes

La determinación de la actividad de las colinesterasas en sangre en trabajadores agrícolas es un valioso indicador de exposición a plaguicidas organofosforados y carbamatos. La actividad debe medirse antes y despúes de la aplicación de estos productos. Los resultados indican la magnitud de la exposición y así proporcionan una base para aconsejar las medidas a tomar, particularmente en el caso de actividades muy deprimidas. Para propósitos de bioverificación, es recomendable el análisis de la acetilcolinesterasa eritrocítica y de la colinesterasa plasmática. En este estudio se determinaron valores de referencia de la actividad de colinesterasa plasmática y eritrocítica en mujeres, hombres y niños y niñas, costarricenses, aparentemente sanos, sin exposición previa a plaguicidas empleando métodos cinéticos basados en la reacción de Ellman. El intervalo de referencia obtenido para la actividad de colinesterasa plasmática en 139 mujeres y 134 hombres con edades entre 17 a 75 años fue de 3700 a 9700 UI/L y 4500 a 9900 U/L, respectivamente. En 50 niñas (de 6 a 13 años) fue de 3820 a 9100 UI/L y en 50 niños (de 6 a13 años) fue de 4660 a 9160 UI/L. Los intervalos de referenica obtenidos para la actividad de colinesterasa eritrocítica corregida por hemoglobina en mujeres, hombres, niñas y niños fueron de 26,1 a 40,9 UI/g Hb; 26,2 a 41,8 UI/g Hb; 24,6 a 37,7 UI/g Hb y 25,9 a 39,3 UI/g Hb, respectivamente. Se recomienda emplear los valores de la actividad colinesterasa plasmática y eritrocítica colinesterasa plasmática y eritrocítica (corregida por hematocrito o hemoglobina) obtenidos en esta investigación como intervalos de referencia nacionales. (Rev Cost Cienc Med 2000; 21(3-4): 117-126). Palabras clave: colinesterasa plasmática, colinesterasa elitrocítica, valores de referencia, plaguicidas, organofosforados, carbamatos.

Inmunoglobulina G Anti Helicobacter Pylori por ELISA y Western-blot en pacientes del Servicio de Gastroenterología del Hospital San vicente de Paul, Heredia / Immunoglobulin G Anti Helicobacter Pylori by ELISA and Western-blot in patients of Gastroenterology Service of San Vicente de Paul Hospital, Heredia

Justificación y objetivo: en Costa Rica el cáncer gástrico es una de las malignidades más frecuentes y de la mayor mortalidad y otros estudios han encontrado asociación entre este y el Helicobacter pylori. Esta bacteria es capaz de producir sustancias que alteran la mucosa gástrica, antígenos que han sido reconocidos por medio del Western-blot. El propósito de este trabajo fue realizar, por primera vez en nuestro país, un estudio de anticuerpos IgG-anti H. pylori por medio de Western-blot y lograr identificar los tipos de antígenos contra los cuales se desarrolla la respuesta inmunológica. Para ello se utilizaron sueros y cepas de H. pylori aisladas de pacientes costarricenses. Asimismo, se compararon los resultados obtenidos del Western-blot con una prueba de ELISA, para determinar la sensibilidad y especificidad diagnóstica, utilizando como referencia el estudio histológico de biopsia gástrica. Métodos: Se obtuvieron muestras de biopsia gástrica y suero de 83 pacientes referidos al Servicio de Gastroscopía del Hospital San Vicente de Paúl, Heredia. A cada uno se le realizó estudio histológico de biopsia gástrica y de anticuerpos IgG-anti H. pylori, por los métodos de ELISA y Western-blot. Resultados y Conclusiones: Por Western-blot se observaron bandas de proteínas de diferentes pesos moleculares, con un predominio de antígenos de H. pylori de bajo peso molecular. El Western-blot y el ELISA presentaron sensibilidades dianósticas del 89 por ciento y el 88 por ciento y especificades diagnósticas del 73 por ciento y el 71 por ciento, respectivamente, comparados con el estudio histológico. Descriptores: H. pylori, IgG, ELISA, Western-blot, suero

Comparative study of urease tests for Helicobacter pilory detection in gastric biopsies

Introducción. Una prueba de ureasa positiva es una fuerte evidencia de infección por Helicobacter pylori (H. pylori). Esta prueba es comúnmente utilizada para la detección de esta bacteria debido a que es un método simple, fácil de realizar y económico, que suministra resultados rápidamente. Materiales y métodos. Se estudiaron 99 biopsias provenientes de pacientes del Departamento de Endoscopía del Hospital San Vicente de Paul, Heredia, Costa Rica. El diagnóstico de H. pylori se basó en el análisis histológico y en el frotis por aposición teñido con Giemsa de biopsias de antro gástrico. Se realizó un estudio comparativo de pruebas de ureasa para el diagnóstico de H. Pylory en biopsia gástrica utilizando los métodos de Ocresolftaleína complexona (OCPC), rojo fenol, Berthelot y agar urea. La sensibilidad y la especificidad de estos métodos fueron comparadas. Resultados. Las sensibilidades y especificidades obtenidas para rojo fenol fue de 97 por ciento y 100 por ciento, para OCPC de 99 por ciento y 100 por ciento, para Berthelot de 97 por ciento y 93 por ciento y para agar urea de 92 por ciento y 96 por ciento, respectivamente. Discusión. El método de la OCPC presentó los mejores resultados, seguido por el rojo fenol. El método de la OCPC presenta la ventaja de tener un reactivo con mayor estabilidad y una menor posibilidad de presentar falsos positivos debido a la contaminación de la cristalería. Sin embargo el rojo de fenol tiene un tiempo de reacción más corto, siendo una ventaja clínica del método

Cuantificación de lecitina en líquido amniótico mediante el efecto lítico de la lisolecitina / Quantification of lecithin in amniotic fluid by the litic effect of lysolecithin

Se describe un método para determinar lecitina en líquido amniótico, el cual se basa en la acción de la fosfolipasa A2 sobre la lecitina originando lisolecitina, que en presencia de una suspensión de eritrocitos, produce ruptura de la membrana de los mismos. La concentración de lecitina se obtiene espectrofotométricamente a 500 nm, determinando la disminución de absorbancia que se produce entre los 20 y 100 segundos. El método es relativamente sencillo, rápido, económico, preciso, exacto y requiere solamente 100 µL de muestra. El análisis comparativo con un método enzimático mostró un coeficiente de correlación r = 0,943 y una ecuación de regresión lineal y = 0,975x + 0,486. El método presenta coeficientes de variación día a día de 3,5 y 4,7 por ciento para concentraciones de lecitina de 14,0 y 5,3 mg/dL, respectivamente. El intervalo analítico es de 15,0 mg/dL. La sangre, meconio y hemoglobina producen interferencia negativa

Determinación de tiocianato en saliva y orina y su validación como parámetro de fumado / Determination of thiocyanate in saliva and urine and its validation as a smoking parameter

Se analizó una muestra de cien individuos voluntarios, cincuenta fumadores y cincuenta no fumadores, a los cuales se les determinó la concentración de tiocianato en saliva y orina; con el fin de verificar si este parámetro es adecuado para discriminar entre fumadores y no fumadores de tabaco. Se empleó un método colorimétrico sencillo, de bajo costo; el cual se basa en la reacción del tiocianato con Fe+3 formando un producto coloreado con máxima absorbancia a 460 nm. El método presenta coeficientes de variación día a día de 1,8 y 9,8 por ciento para concentraciones de tiocianato de 2.564 y 40 µmol/L respectivamente. El intervalo analítico es de 0 a 3.000 µmol/L y se obtuvo una recuperación promedio de 99 por ciento. Los promedios de la concentración de tiocianato en orina fueron de 3,8 y 96,6 230mol/L y en saliva de 646 y 2.521 µmol/L para no fumadores y fumadores respectivamente, estas diferencias son significativas (p < 0,0001). Los niveles de decisión, para diferenciar personas fumadoras de no fumadoras, son de 25 y 1.500 230mol/l, para muestras de orina y saliva respectivamente. Usando estos valores se obtuvo una eficiencia diagnóstica del 91 por ciento en orina y 89 por ciento en saliva

Evaluación de un método enzimático colorimétrico para la cuantificación de colesterol sérico / Evaluation of a colorimetric enzymatic method for the quantification of serum cholesterol

Se evaluó un método enzimático colorimétrico para cuantificación de colesterol sérico, basado el la reacción de Trinder. La técnica consiste en mezclar 2,0 mL de reactivo de trabajo previamente preparado, con 20 uL de suero. La absorbancia es leída a 500 nm contra blanco de reactivos después de 15 minutos de incubación a 37 grados centígrados. El intervalo analítico es de 25 a 600 mg/dL. La comparación de los resultados con el método de colesterol total en suero por extracción dió una regresión lineal de Y=-0,4223+0,8907 (x), con un coeficiente de correlación (r) de 0,958 y una desviación estándar sobre la línea de regresión (Sy/x) de 24 mg/dL. Con el método Coleterol Fast Color se obtuvo una regresión lineal de Y=19,5+1,02 (X), un coeficiente de correlación (r) de 0,972 y una desviación estándar sobre la línea regresión de 13 mg/dL. Con el método Colestat la regresión lineal fue de Y=25+1,000 (x) con un coeficiente de correlación (r) de 0,983 y una desviación estándar sobre la línea de regresión lineal de 16 mg/dL. Las presiciones día a día para muestras con valores de colesterol bajos, normales y altos mostraron coeficientes de variación de 1,8; 9 y 1,5 por ciento y en un mismo día de 2,3; 3,3 y 2,4 por ciento respectivamente. La hemoglobina y el ácido acetilsalicílico en consentraciones de 50 mg/dL no bilirrubina produce una interferencia de 0,42 por ciento. El reactivo de trabajo almacenado en botella ámbar es estable por al menos 3 semanas a 2-8 grados centígrados. El reactivo es estable por lo menos un año si la solución consentrada de enzimas se almacena en congelación a -70 grados centígrados o en forma liofilizada, y por al menos dos meses a +4 grados centígrados. Las concentraciones óptimas incluyen 1,5 mmol/L de 4-aminofenazona, 0,5 g/L de Triton X-100, 3 mmol/L de colato de sodio, 16,umol/L de hexacianoferrato de potasio II, 15 mmol/L de fenol, 1000 U/L de peroxidasa, 250 U/L de colesterol oxidasa y 500 U/L de colesterol esterasa.